SABC-AP免疫组化染色试剂盒(兔IgG)

产品货号：

ZN1821

中文名称：

SABC-AP免疫组化染色试剂盒(兔IgG)

英文名称：

Instant SABC-AP IHC Kit(Rabbit IgG，BCIP/NBT)

产品规格：

80T|160T

发货周期：

1～3天

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本试剂盒采用SABC-AP系统，适于一抗类型为兔IgG的免疫组化实验。SABC是专为免疫组化和其他免疫检测而设计的，用以显示组织和细胞中抗原分布。链霉亲和素对生物素分子有极高的亲和力，是一般抗原抗体亲和力的一百万倍，等电点pI=6.0～6.5，对组织和细胞的非特异吸附很低。链霉亲和素用戊二醛方法偶联小牛肠中的碱性磷酸酶，特异性的和生物素分子结合，保证SABC具有高的敏感性。所以SABC兼具高敏感性，低背景和操作简便等优点。百奥莱博采用独特方法生产的SABC不仅有很强的信号放大作用，而且非常稳定。本试剂盒为即用型，无需稀释，可以直接使用。

产品组成

组分	80T	160T	说明
5%BSA封闭液	6mL	12mL	用于组织切片的封闭
生物素标记山羊抗兔IgG	6mL	12mL
SABC-AP(链酶亲和素-碱性磷酸酶)	6mL	12mL	催化BCIP/NBT显色
BCIP/NBT显色剂(×20)	0.5mL	1mL	用于免疫组化显色
水溶性封片剂	6mL	12mL	用于含水的组织切片的封片
中性核固红	6mL	12mL	复染

保存：4℃可保存一年，应避免冷冻。

自备试剂

粘片剂APES（ZN1946）或POLY-L-LYSINE（ZN1945）。
EDTA修复液（ZN1951）。
0.01M枸橼酸盐缓冲液（ZN1955）：1000mL蒸馏水中加枸橼酸三钠（C6H5Na3O7·2H2O）3g，枸橼酸(C6H8O7·H2O) 0.4g。

注：免疫组化染色程序的选择：用户需根据抗原/抗体的特点确定程序，多数情况下要先比较各程序染色结果。
A程序：石蜡切片热修复抗原程序。促进某些位于蛋白质内部的位点暴露。
B程序：石蜡切片酶消化程序。促进某些被固定遮避的抗原位点暴露。
C程序：石蜡切片不消化/不修复程序。适于稳定的抗原。
D程序：细胞涂片，冰冻切片染色程序。

石蜡片热修复染色步骤：
- 石蜡切片，常规脱蜡至水。
- 根据需要选择抗原修复方式及强度。可热修复、酶修复或不修复。
- 热修复抗原：将切片浸入到EDTA修复液中，微波炉加热到沸腾后断电，间隔5～10min再修复1～2次，冷却。
- 滴加5%BSA封闭液，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加生物素标记山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加SABC—AP，37℃孵育30min。0.01M TBS冲洗，5min×4次。水洗1次。
- 显色：BCIP/NBT用0.01M TBS(pH9.0～9.5)按1:20的比例稀释，混匀后加至切片。镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
- 核固红轻度复染。水洗，干燥后水溶性封片剂封片(ZN2946)。
- 显微镜观察。
石蜡片酶消化染色步骤：
将A程序的第4步：滴加酶消化液室温5～10min。酶修复可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)消化组织。蒸馏水洗2min×3次。
石蜡切片酶不消化/修复程序：
对于不需要微波修复或消化的抗原，省略A程序中的第4步即可。
细胞片的染色步骤：
- 爬片。圆形盖破片经防脱片剂处理（Poly-L-Lysine），灭菌，备用。
  贴壁细胞消化后加入放有盖玻片的24孔板中培养1～2天，使细胞贴壁。
  悬浮细胞则处理后直接涂片，使细胞贴附。
- 固定。4℃预冷4%多聚甲醛固定20min或冷丙酮固定10min。蒸馏水洗2min×3次。
- 打孔。0.25% Triton X-100处理细胞15min。（若采用丙酮固定则此步骤可省略）
- 酶消化处理室温5～10min。酶消化可选用复合修复液(ZN1952)、胰蛋白酶(ZN2944)、胃蛋白酶(ZN2945)。蒸馏水洗2min×3次。
- 滴加5%BSA封闭液，37℃孵育30min，甩干，勿洗。
- 滴加适当稀释的一抗，37℃孵育1～2小时或4℃过夜。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加生物素标记山羊抗兔IgG，37℃孵育30min。PBS冲洗，5min×3次。
- 滴加SABC—AP，37℃孵育30min。0.01M TBS冲洗，5min×4次。水洗1次。
- 显色：BCIP/NBT用0.01M TBS(pH9.0～9.5)按1:20的比例稀释，混匀后加至切片。镜下控制反应时间。蒸馏水洗涤。
- 核固红轻度复染。水洗，干燥后水溶性封片剂封片(ZN2946)。
- 显微镜观察。

如果染色背景过高，在SABC反应之后，BCIP/NBT显色之前，用加有0.01～0.02% TWEEN20的PBS洗涤切片4次，单纯PBS洗2次，然后显色。
热修复抗原可选0.01M枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）；也可以使用PBS、TBS等多种缓冲液。

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